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生物实验室如何防止气溶胶污染?PCR实验室气溶胶污染防范要点

2020年02月11日


目前可确定的新冠肺炎传播途径主要为直接传播、气溶胶传播、结婚粗传播。那么生物实验室如何防止气溶胶污染?SAREN三仁为您详解PCR实验室的气溶胶污染防范要点。

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生物安全实验室装修

PCR(聚合酶链式反应)技术的应用和发展使得疾病诊断得到更有效的证据,尤其是荧光定量PCR的推广与应用,大大提高了检测的灵敏性及准确性。然而随着该项技术在病原检测实验室的广泛应用,PCR实验室的气溶胶污染问题逐渐引起人们关注。为了有效地避免PCR实验室DNA/RNA气溶胶污染,获得稳定、可靠的检验结果,防止出现假阳性,PCR实验室要建立严格的防污染措施和相应的污染监测体系来防范气溶胶污染污染,一旦发现气溶胶污染,要及时查找原因,并相应解决污染问题。

一、实验室气溶胶污染及其来源

气溶胶污染是指实验室在长期运行中,PCR产物不断积聚,附着在空气中的颗粒中,并悬浮于气体介质中形成的胶体分散体系,造成PCR检验的结果发生改变。

实验室气溶胶防治SAREN

二、实验室气溶胶防范措施

1. 实验室分区

PCR实验室应该按照2002 年公布的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》及《医疗机构临床扩增实验室管理办法》 (卫办医政发〔2010〕194号)规定分为四区,分别是试剂准备区、标本制备区、PCR扩增区、产物分析区,前两区为扩增前区,后两区为扩增后区。扩增前区与扩增后区应严格分开,同时配备通风与净化,形成科室之间的压差。工作流程,包括实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→标本处理区→扩增区→产物分析区,不得逆向流动。严禁在洁净走廊反向,同时在各科室、相应缓冲间及洁净走廊之间形成不同梯度的压差,使空气流动与工作方向相同。

PCR实验室建设

工作流向及空气流动方向

2. 设置对照

每次实验前均准备两个阴性对照(均以水作为模板,一个与样品参与核酸提取,另一个不参与提取,仅在配置扩增体系时加入),以便对实验室气溶胶污染情况进行监测,判断有无污染,是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。同时要设定一个阳性对照,用于监测实验结果的可靠性和准确性。

3. 实验室气溶胶监测

采用家用空气净化器定期对实验室空气进行净化,将净化器中的过滤网浸入水中,混匀后,以混合后的水作为样品进行相应检测,以便及时了解空气中气溶胶的污染情况。定期采集移液枪、提取仪、扩增仪等仪器内部及表面的棉拭子样品进行检测,以便了解实验仪器中的污染情况。

4. 严格的工作流程

PCR各个科室分别配备各自的工作服,可以以颜色区分,进入各科室必须更换相应的工作服;同时在洁净走廊入口配备PCR室专用鞋,进入必须更换,各科室前配备毡垫。洁净走廊中实验室人员只能从试剂准备区方向前往结果分析区方向,在条件允许的情况下各科室分别配备不同的人员进行操作,避免各科室人员互相窜动。

5. 加强清洁与消毒

做好实验室的清洁及消毒工作是防止实验室内发生气溶胶污染的有效途径。实验室的清洁范围包括工作台面(试验台、超净台和存储柜等)、仪器设备表面(离心机的转头、提取DNA用的加热块、扩增仪的样品槽、移液器杆的吸孔、遗传分析仪的加样槽等)、重复使用的工具或器皿等的清洁。

实验开始前后,先用新鲜配制的10%的次氯酸钠溶液将上述区域及仪器的表面反复擦拭,再用75%乙醇擦洗以去除残留物,待酒精挥发后方可进行试验。这样可以有效清除它们表面附着的各种污染物。同时定期对实验室进行紫外灯照射消毒。

6. 提高实验室人员规范操作意识

定期组织实验室人员进行防污染安全培训,宣讲PCR实验室操作规范,印发并讲解《医疗机构临床扩增实验室管理办法》(卫办医政发〔2010〕194号)、《关于做好血站核酸检测工作的通知》(国卫办医发〔2015〕11号)、《血站核酸检测实验室质量保证指南》、 《法庭科学DNA实验室规范》(GA/T382-2002)、《法庭科学DNA实验室检验规范》(GA/T383-2002)等文件。

实验室气溶胶污染是现阶段实验室运行中最重要的防范方向,除了上述防范措施之外,实验室要定期进行去除核酸的操作,同时将质量为先,数量次之,否则一旦出现气溶胶污染,实验室将无法继续运行。气溶胶污染的结果会影响实验室检测结果的质量,降低检测结果的使用价值,严重时会造成疾病判断的误判或错判,不能及时处理临床疾病,导致严重经济损失。实验室一旦发现有气溶胶污染的存在,必须认真查找污染源,分析造成的原因,并针对原因提出相应的解决方案,同时还要对这一时期获得的检测数据进行复核,查找是否存在未被发现的污染情况。


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